内参蛋白是指由管家基因(house keeping gene)编码表达的一类蛋白,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在实验中检测蛋白的表达水平变化时常用它们来做参照物。
这些内参蛋白常应用于Western Blot中,Western Blot不仅能证明样品中是否含有某种蛋白,还能比较不同条件、不同组织和细胞中目的蛋白的相对含量,从而衡量蛋白的表达水平。内参蛋白作为一种参照物,在其中的作用为确定样本使用量的一致性,以及校正实验过程中可能出现的操作误差,从而进一步保证实验结果的准确性。那么对于不同的蛋白,内参蛋白该如何选择呢?
一、内参蛋白的选择首先是考虑分子量。
一般情况下,内参蛋白和检测的目的蛋白最好相差在5kDa以上。如分子量为45kDa的检测蛋白,我们可以选择Tubulin Beta(54kDa),Lamin B1(66kDa)等,而不选择ACTa2(42kDa)或者beta-actin(45kDa)。
二、对于不同的组织,应选择不同的内参。
如肌动蛋白是一种细胞骨架蛋白,有六种不同的亚型,包括: alpha-skeletal muscle actin、alpha-cardiac muscle actin、alpha-smooth muscle actin、gamma-smooth muscle actin、beta-actin (β-non-muscle)和 gamma-non-muscle actin。其中常用作 Western Blot 内参的beta-actin在肌肉和脂肪组织中分布较少,那么若样本是心肌或脂肪组织来源的,就可以考虑分别用alpha-cardiac muscle actin (ACTC1)和GAPDH作为内参蛋白。
三、提取蛋白的部位不同,选择的内参蛋白也不同。
比如有时胞质、胞核分开提取而不提取总蛋白时,就要选择相应部位表达的内参蛋白。如PCNA在细胞核中高效稳定表达,理论上在细胞质不表达,那么对于胞质提取的蛋白,就不能选用PCNA作为内参蛋白,而应该选择细胞质中表达的Tublin Beta、Actin Beta等作为内参蛋白。
表1. 各种内参蛋白抗体
目标蛋白的组织表达部位 |
亚细胞定位 |
目标蛋白的分子量 |
内参蛋白(靶蛋白) |
推荐产品货号 |
胰腺,乳腺,胃等 |
胞质,核,膜 |
36kDa |
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) |
CAB932Mi22、CAB932Hu22 |
肌肉 |
胞质 |
42kDa |
心肌肌动蛋白α1(ACTC1) |
CAB341Hu22 |
阑尾,脾扁桃体,胃,乳腺等 |
胞质 |
45kDa |
肌动蛋白β(ACTb) |
CAB340Mi22 |
脑,睾丸,皮肤,结肠等 |
胞质 |
54kDa |
微管蛋白β(TUBb) |
CAB870Hu22、CAB870Mi22 |
肝,肾,肺,睾丸,胃等 |
核 |
17kDa |
组蛋白H3(Histone H3) |
PAA285Mi01 |
睾丸,小肠,甲状腺等 |
核 |
35kDa |
抗增殖细胞核抗原(PCNA) |
PAA591Mi01 |
平滑肌 |
核 |
74kDa |
核纤层蛋白A/C(LMNA) |
CAF550Hu22 |
脑,肝等 |
核 |
66kDa |
核纤层蛋白B1(LMNB1) |
PAF548Mi01 |
甲状腺,胰腺,前列腺等 |
细胞膜 |
113kDa |
钠/钾离子转运ATP酶α1肽(ATP1a1) |
PAG369Mi01 |
食道,甲状腺等 |
胞质 |
70kDa |
70kDa热休克蛋白1A(HSPA1A) |
PAB081Hu01 |
脑,小肠,食道等 |
胞质,核 |
43kDa |
细胞外信号调节激酶1(ERK1) |
CAB357Hu01 |
肾,乳腺,睾丸等 |
胞质,核 |
42kDa |
细胞外信号调节激酶2(ERK2) |
CAA930Hu01 |
平滑肌,乳腺等 |
胞质 |
42kDa |
平滑肌肌动蛋白α2(ACTa2) |
CAB342Hu22 |
结肠,皮层神经元等 |
胞质 |
85kDa |
连环蛋白β1(CTNNb1) |
MAB021Hu21 |
肌肉 |
胞质 |
124kDa |
纽蛋白(VCL) |
CAB839Mi22 |
肺,肝,睾丸,胎盘等 |
线粒体外膜 |
30.8kDa |
电压依赖性阴离子通道蛋白1(VDAC1) |
PAG901Hu01 |
脑,胃,肾等 |
内质网 |
90kDa |
钙联蛋白(CNX) |
MAA280Hu22 |
肝 |
细胞膜 |
85kDa |
转铁蛋白受体(TFR) |
PAB171Mu01 |
血小板,脑,心 |
细胞膜 |
123kDa |
血小板衍生生长因子受体α(PDGFRa) |
PAC060Hu01 |
肌肉,脑,肝,肾等 |
线粒体内膜 |
19.6kDa |
细胞色素C氧化酶亚基IV亚型1(Cytochrome C Oxidase Subunit IV Isoform 1, COX4I1) |
PAD286Hu01 |
睾丸,卵巢等 |
核 |
38kDa |
TATA盒结合蛋白(TATA Binding Protein, TBP) |
MAB703Hu22 |
心,胰腺,睾丸等 |
核 |
55kDa |
组蛋白脱乙酰基酶1(Histone Deacetylase 1,HDAC1) |
MAC206Hu22 |
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