一、SDS-PAGE出现异常条带?
1. SDS-PAGE胶图微笑现象?
可能原因：凝胶的中间部分凝固不均导致。
解决办法：待其充分凝固后再做实验。
2. SDS-PAGE胶图拖尾现象?
可能原因：样品融解效果不佳；电泳缓冲液时间过长；分离胶浓度过大引起。
解决办法：加样前离心；加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。
3. SDS-PAGE胶图条带粗?
可能原因：蛋白在浓缩胶中未浓缩好。
解决办法：增加浓缩胶长度；保证浓缩胶的pH正确；降低电压。
4. SDS-PAGE胶图纹理现象?
可能原因：样本中有不溶性颗粒。
解决办法：加样前离心；加适量样品促溶剂。
二、蛋白质印迹(Western blot，WB)实验如何选择转膜条件及膜?
1.转膜效率：湿转过夜>湿转3小时>半干转1小时
2.NC膜和PVDF膜对比：
| NC膜 | PVDF膜 | |
| 物理强度 | 差 | 好 |
| 溶剂耐受力 | 无 | 有 |
|
SDS存在下蛋白质结合力 |
差 | 好 |
因此，针对转膜我们有以下建议：
①在转膜过程中，靶蛋白分子量小转膜时间适当缩短，分子量大则适当延长转膜时间；
②优先选择聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，其相对硝酸纤维素（NC）膜机械强度高，和蛋白结合牢。
三、蛋白质印迹(Western blot，WB)结果分析
1. 条带出现降解或断裂带?
处理方法：样本制备过程中尽量保持低温，避免蛋白变性、降解、断裂，对于胃肠胰等蛋白酶含量高的样本建议添加蛋白酶抑制剂，蛋白酶抑制剂建议新鲜配制。
2. 曝光时间过长或过短出现非特异性带或条带消失?
处理方法：建议选不同时间点多曝光几次。
3. 条带不整齐?
原因分析和处理方法：
①可能是由于胶凝固不均匀，建议待胶完全凝固后上样；
②可能是由于电泳的时，有气泡在胶的下边缘，建议电泳前，检查并赶走胶底部的气泡；
③可能是由于上样buffer不是工作液浓度，建议重新配置上样buffer；
④可能是由于拔梳子导致样品孔不齐，建议水平缓慢的拔梳子。
4. 无条带？
原因分析和处理方法：
①可能是转膜失败，可以通过丽春红染色检验；
②可能是一抗二抗用错或浓度不合适，可设置阳性对照或重新调整抗体浓度；
③ECL发光底物失效，可换用新的发光底物。
5. 杂带多？
原因分析和处理方法：
①非特异条带，可能是一抗特异性不好，也有可能是二抗，可以更换抗体试试；
②蛋白有多个isoform，或者是前体、剪切、修饰；
③样本制备过程中蛋白出现降解或者断裂带，重新制备样本。
WB的实验流程相对较长，每个步骤都会对最后的实验结果造成影响，在实验过程中应步步监测，做好质控，以便随时发现问题并解决问题。
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