ELISA 实验中，实验者经常会遇到样本测值低的问题，针对这一问题，我们分析了可能的原因和建议解决方案。
原因1：试剂盒保存不当，导致试剂部分或完全失效。
解决方案：请按说明书要求保存试剂盒。检测液 A、检测液 B、标准品以及酶标条等储存在-20℃，而其它试剂需储存在4℃。
原因2：样本反复冻融，样本反复冻融会导致样本中蛋白降解。
解决方案：收集样本制备后，立即进行检测或进行分装后冻存-20℃或-80℃，避免样本反复冻融。
原因3：样本保存不当或保存时间过长。长时间的储存有可能导致目标蛋白的降解， 致使检测结果不理想。
解决方案：建议使用新鲜的样本。标本均需密封保存，4℃保存小于 1 周，-20℃不超过 1 个月，-80℃不超过 2 个月。
原因4：样本稀释过度以及稀释不足均有可能导致样本的测值低。稀释过度，导致样本中靶分子含量太低而出现测值低现象；稀释不足，样本中抗原过量会出现后带效应。即当样本中目标物含量很高，而没有进行正确的稀释，就有可能会导致假阴性反应。
解决方案：血清血浆样本可参考试剂盒推荐的稀释倍数进行实验。其它生物样本，样本收集和制备过程中影响因素太多，建议做预实验确定样本稀释倍数。可参考文献，将样本进行梯度稀释，最后选取样本O.D.值落在标准曲线中间位置的点的稀释倍数。
原因5：分析物在样品中本身浓度偏低。大多数细胞因子在正常情况下表达量很低，如IL-6需在炎症刺激情况才会大量产生，一般非炎症样本或未刺激处理样本测值会非常低。
解决方案：建议根据文献选取适合的刺激方案。对于这些细胞因子，云克隆除了验证血清血浆样本（多数阴性），也会验证未处理的细胞上清（多数阴性）和刺激处理后细胞上清样本（阳性样本）。或者选择高灵敏度试剂盒，以提高样本中细胞因子的检出率。
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