TGF-β的分泌与活化机制

TGF-βs由多种类型的细胞分泌。所有三种TGF-β均以含二硫键连接的同源二聚体形式合成，并包含前体肽区（propeptide region）。新合成的TGF-β同源二聚体会与 ​潜伏相关肽（LAP，一种源自TGF-β基因产物的N端信号肽，含20-30个氨基酸）​ 结合，形成称为 ​小潜伏复合体（SLC）​ 的复合体。该复合体在细胞内保留，直至与另一蛋白 ​潜伏TGF-β结合蛋白（LTBP）​ 结合，形成更大的复合体 ​大潜伏复合体（LLC）​。最终，​LLC被分泌至细胞外基质（ECM）​。因此，大多数生物样本中的TGF-β以潜伏形式（LLC）存在。需对样本进行进一步处理以释放TGF-β的活性形式。经活化后，由于ELISA试剂盒中的抗体特异性识别游离TGF-β，可准确测定样品中TGF-β的水平。

组分信息

预期应用

本方法适用于从血清/血浆/细胞培养上清[说明书中目前只有这三种样本的活化方法]等样本中释放TGF-β。经活化后，ELISA试剂盒中的抗体特异性结合游离TGF-β，可准确测定样品中TGF-β的水平。

样本活化步骤​

1. 血清/血浆样本 ​

步骤1：取50μL血清/血浆，加入10μL活化试剂A，充分混匀。 ​

步骤2：室温孵育10分钟。 ​

步骤3：加入10μL活化试剂B中和酸性样本，充分混匀后加入80μL标准稀释液，再次混匀。立即进行测定。 ​

稀释校正：样本浓度需乘以稀释倍数3。 ​

2. 细胞培养上清样本 ​

步骤1：取100μL细胞培养上清，加入20μL活化试剂A，充分混匀。 ​

步骤2：室温孵育10分钟。 ​

步骤3：加入20μL活化试剂B中和酸性样本，充分混匀后立即进行测定。

​稀释校正：样本浓度需乘以稀释倍数1.4。

短期保存：室温（约20-25℃）保存，保存期限 ​1个月；

​长期保存：2-8℃冷藏，保存期限 ​1年。

1. pH值控制：中和后样本pH值需在 ​7.2-7.6 之间。若偏离此范围，需调整中和试剂用量及对应稀释倍数。 ​

2. 样本稳定性：活化后样本需立即测定，不可冷冻保存。 ​

3. 试剂储存：试剂可保存于室温下的聚丙烯瓶中，需拧紧瓶盖防止挥发。 ​

4. 实验安全：操作试剂时需穿戴防护服和安全眼镜。

5. ​试剂用途限制：不可用于活化试剂盒中的标准品。